經濟型透析袋透析只需要使用的半透膜(mó)即可完成(chéng)。通常是將半透膜(mó)製成(chéng)袋狀
,將生物大(dà)分子樣品(pǐn)溶液置入袋內,將此經濟型透析袋浸入水或緩衝液中
,樣品(pǐn)溶液中的大(dà)分子量的生物大(dà)分子被截留在(zài)袋內,而鹽和小分子物質不斷(duàn)擴散透析到袋外,直到袋內外兩邊的濃度達到平衡為止
。保留在(zài)經濟型透析袋內未(wèi)透析出的樣品(pǐn)溶液稱為“保留液”
,袋(膜(mó))外的溶液稱為“滲出液”或“透析液”。
透析的動力是擴散壓 ,擴散壓是由(yóu)橫(héng)跨膜(mó)兩邊的濃度梯(tī)度形(xíng)成(chéng)的
。透析的速度反比於(yú)膜(mó)的厚度,正比於(yú)欲透析的小分子溶質在(zài)膜(mó)內外兩邊的濃度梯(tī)度,還正比於(yú)膜(mó)的面積(jī)和溫度
,通常是4℃透析,升高溫度可加快透析速度
。
透析膜(mó)可用動物膜(mó)和玻璃紙(zhǐ)等(děng)
,但用的zui多的還是用纖維素製成(chéng)的透析膜(mó),目前常用的是美國(guó)SPECTRUM公(gōng)司生產的各種尺寸的透析管
,截留分子量MwCO(即留在(zài)經濟型透析袋內的生物大(dà)分子的zui小分子量,縮(suō)寫為MwCO)通常為1萬左右。
商(shāng)品(pǐn)經濟型透析袋製成(chéng)管狀,其(qí)扁平寬度為23 mm~50 mm不等(děng)。為防乾裂,出廠時都用10%的甘油(yóu)處理過
,並含有(yǒu)極微量的硫化物、重金屬(shǔ)和一些具(jù)有(yǒu)紫外吸(xī)收的雜質,它(tā)們對蛋白質和其(qí)它(tā)生物活性物質有(yǒu)害,用前必須除去(qù)。可先用50%乙醇煮沸1小時,再依次用50%乙醇、0.01 mol/L碳酸氫鈉和0.001 mol/L EDTA溶液洗(xǐ)滌 ,zui後用蒸餾水沖洗(xǐ)即可使用
。實(shí)驗證明,50%乙醇處理對除去(qù)具(jù)有(yǒu)紫外吸(xī)收的雜質特別有(yǒu)效。使用後的經濟型透析袋洗(xǐ)淨後可存於(yú)4℃蒸餾水中,若長(zhǎng)時間(jiān)不用
,可加少量NaN3
,以(yǐ)防長(zhǎng)菌
。洗(xǐ)淨涼乾的經濟型透析袋彎折時易裂口,用時必須仔細檢查
,不漏時方(fāng)可重復使用。
新經濟型透析袋如不作如上(shàng)的特殊處理,則可用沸水煮五(wǔ)至十分鐘
,再用蒸餾水洗(xǐ)淨,即可使用
。使用時
,一端用橡皮筋或線繩扎緊,也可以(yǐ)使用特製的經濟型透析袋夾夾緊
,由(yóu)另一端灌滿水,用手(shǒu)指稍加壓,檢查不漏
,方(fāng)可裝(zhuāng)入待透析液,通常要留三分之一至一半的空間(jiān),以(yǐ)防透析過程中,透析的小分子量較大(dà)時,袋外的水和緩衝液過量進入袋內將袋漲(zhǎng)破。含鹽量很高的蛋白質溶液透析過夜時
,體積(jī)增加50%是正常的。為了加快透析速度,除多次更(gèng)換(huàn)透析液外
,還可使用磁子攪拌
。透析的容器要大(dà)一些
,可以(yǐ)使用大(dà)燒杯、大(dà)量筒和塑(sù)料桶。小量體積(jī)溶液的透析
,可在(zài)袋內放一截兩頭燒園(yuán)的玻璃棒或兩端封口的玻璃管
,以(yǐ)使經濟型透析袋沈入液面以(yǐ)下。
檢查透析效果的方(fāng)法是
:用1% BaCl2檢查(NH4)2SO4
,用1% AgNO3 檢查NaCl
、KCl等(děng)
。
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