omega試(shì)劑盒利用DNA擴增的線(sī)性原(yuán)理(lǐ),可(kě)以測(cè)定樣品(pǐn)中已知序列的絕對或相(xiàng)對量。qPCR會(huì)監測(cè)每個(gè)PCR循環(huán)中的DNA擴增
。當(dāng)DNA處於對數線(sī)性擴增階段時
,螢光量相(xiàng)對於背景增加。螢光積累至可(kě)測(cè)的那一點稱為閾值循環(huán)(CT)或交叉點
。通過(guò)使用已知量的標準DNA的多次稀釋
,可(kě)以產生對比CT的對數濃度(dù)的標準曲線(sī)。
下(xià)面咱們(men)來一起瞭解(jiě)一下(xià)
omega試(shì)劑盒的樣本處理(lǐ)方法,希望對您有所幫助
。
1、血清
:室(shì)溫血液(yè)自(zì)然(rán)凝固10-20分鐘
,離心(xīn)20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)
。仔細收集上清
,保存(cún)過(guò)程中如出現沈澱,應再次離心(xīn)
。
2
、血漿
:應根(gēn)據標本的要求選擇(zé)EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合(hé)10-20分鐘後,離心(xīn)20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清
,保存(cún)過(guò)程中如有沈澱形(xíng)成(chéng),應該(gāi)再次離心(xīn)
。
3、尿液(yè)
:用無菌管收集
,離心(xīn)20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清
,保存(cún)過(guò)程中如有沈澱形(xíng)成(chéng)
,應再次離心(xīn)。胸腹水、腦脊液(yè)參照實行。
4、細胞培養上清
:檢測(cè)分泌性的成(chéng)份時
,用無菌管收集。離心(xīn)20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)
。仔細收集上清
。檢測(cè)細胞內的成(chéng)份時
,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液(yè),細胞濃度(dù)達到100萬/ml左右
。通過(guò)反復凍融
,以使細胞破壞並放(fàng)出細胞內成(chéng)份
。離心(xīn)20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)
。仔細收集上清
。保存(cún)過(guò)程中如有沈澱形(xíng)成(chéng)
,應再次離心(xīn)。
5、組織標本:切割標本後,稱取重(zhòng)量
。加入一定量的PBS
,PH7.4
。用液(yè)氮迅速(sù)冷凍保存(cún)備用。標本融化後仍然(rán)保持2-8℃的溫度(dù)
。加入一定量的PBS(PH7.4)
,用手工或勻(yún)漿器將標本勻(yún)漿充分
。離心(xīn)20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清
。分裝後一份待檢測(cè)
,其餘冷凍備用
。